沙眼衣原體的實(shí)驗(yàn)室檢查包括病原學(xué)方法和非病原學(xué)方法。病原學(xué)方法包括衣原體直接鏡檢、衣原體培養(yǎng)、衣原體抗原檢測(cè)(免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和直接免疫熒光法)、衣原體核酸檢測(cè)(包括核酸探針雜交和PCR);非病原學(xué)方法包括衣原體抗體檢測(cè)(用衣原體抗原檢測(cè)血中特異的衣原體抗體)、組織病理和尿白細(xì)胞計(jì)數(shù)。本篇內(nèi)容主要介紹分離培養(yǎng)與鑒定、藥敏試驗(yàn)、抗體檢測(cè)。
一、分離培養(yǎng)與鑒定 細(xì)胞培養(yǎng)法用于分離培養(yǎng)衣原體,敏感性70%~90%,特異性達(dá)99%,此法對(duì)技術(shù)和設(shè)備要求較高且費(fèi)用昂貴,培養(yǎng)有一定難度,也可能出現(xiàn)假陰性。因此不適合大樣本病例。
1、雞胚分離培養(yǎng)
1907年捷克學(xué)者Harberstaedter和von Prowazek發(fā)現(xiàn)衣原體開(kāi)始,各國(guó)學(xué)者都致力于衣原體的分離純化,但半個(gè)世紀(jì)內(nèi),由于有可能將某些發(fā)光顆粒(白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、色素顆粒)、細(xì)菌和酵母菌誤認(rèn)為沙眼衣原體,因此此法對(duì)于實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)水平要求較高。以后,我國(guó)著名微生物學(xué)家湯飛凡教授用雞胚分離的經(jīng)典方法首次分離成功,從而將衣原體的研究推向了新的高潮。卵黃囊培養(yǎng)對(duì)衣原體的早期分離功不可沒(méi),但陽(yáng)性率低,自有細(xì)胞培養(yǎng)后,臨床基本不再使用。
2、細(xì)胞分離培養(yǎng)
C.t是專性的細(xì)胞內(nèi)寄生物,它只能在細(xì)胞中生長(zhǎng),McCoy細(xì)胞(小鼠成纖維瘤細(xì)胞)提供了衣原體生長(zhǎng)繁殖的必備條件,因此,常用它來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)和檢測(cè)。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)法陰性標(biāo)本盲傳一代后仍為陰性,即確診為陰性。然而有研究報(bào)道在一些有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室,增加傳代培養(yǎng)的次數(shù)會(huì)明顯提高沙眼衣原體泌尿生殖道感染的檢出率。目前,單層細(xì)胞和培養(yǎng)基均有商品供應(yīng),雖費(fèi)用較高,但很容易獲得,另外常用的還有HeLa229細(xì)胞、BHK21細(xì)胞、MCF7,HaCaT細(xì)胞和HL細(xì)胞株等。細(xì)胞培養(yǎng)法一直是沙眼衣原體實(shí)驗(yàn)室檢查的金標(biāo)準(zhǔn),然而由于敏感性相對(duì)較低,不同實(shí)驗(yàn)室檢出的陽(yáng)性率差別較大,而且耗時(shí)、費(fèi)錢,需要一定的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,不適用于臨床門診中大量患者的實(shí)驗(yàn)室檢查。
3、衣原體微量快速培養(yǎng)法
很多學(xué)者對(duì)衣原體細(xì)胞培養(yǎng)方法做了改進(jìn),細(xì)胞培養(yǎng)由玻璃瓶改為試管,由試管改為微量快速的96孔板,同時(shí)也有改為適用于一般實(shí)驗(yàn)室的平皿法。
二、藥敏試驗(yàn)
日本化學(xué)療法學(xué)會(huì)1992年建立的衣原體最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定方法是參照衣原體屬國(guó)際通用的測(cè)定法而制定的標(biāo)準(zhǔn)法,在我國(guó)尚未建立衣原體的藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)法。
三、抗體檢測(cè)
人體感染衣原體后,產(chǎn)生相應(yīng)抗衣原體抗體,檢測(cè)這些特異性抗體可確定有無(wú)衣原體感染。檢測(cè)血清抗體不同種類的臨床意義也不盡相同。抗衣原體IgM抗體在成人生殖道感染并不常見(jiàn);抗衣原體IgG抗體陽(yáng)性率在性活躍人群高,盡管可以無(wú)活動(dòng)性感染,既往感染足以引起陽(yáng)性;而衣原體特異性血清IgA抗體則與疾病活動(dòng)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。用于各型衣原體感染的血清學(xué)試驗(yàn)包括補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、微量免疫熒光試驗(yàn)、間接免疫熒光和酶免疫吸附試驗(yàn)等。微量免疫熒光試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)常用。血清學(xué)方法對(duì)診斷生殖道衣原體感染的合并癥有意義。患輸卵管炎或肝周圍炎的女性或患附睪炎的男性患者血清抗體滴度非常高。此外,用酶免疫法測(cè)定衣原體抗體和微量免疫熒光法一樣敏感,但不能用于新近感染。
血清學(xué)試驗(yàn)的診斷價(jià)值有局限性:①到目前為止還沒(méi)有一種試驗(yàn)?zāi)芡耆m用于所有種類衣原體感染;②由于感染早期癥狀較輕微,往往錯(cuò)過(guò)急性期標(biāo)本的采集時(shí)間;③由于血清抗體可持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間,單一血清標(biāo)本檢測(cè)到的抗體只能說(shuō)明以前感染過(guò)衣原體,只有當(dāng)恢復(fù)期血清抗體與急性期抗體相比滴度有4倍增高并伴有臨床癥狀時(shí)才支持目前有衣原體感染。由于敏感性、特異性、預(yù)測(cè)值不夠理想,血清學(xué)檢查不建議作為臨床診斷疾病的活動(dòng)性的手段。
目前沒(méi)有一個(gè)同時(shí)具備快速、特異性、敏感、價(jià)廉等特點(diǎn)的檢測(cè),再加上沙眼衣原體泌尿生殖道感染臨床表現(xiàn)隱匿,及時(shí)診治變得很困難。目前的檢測(cè)標(biāo)本采集主要是尿道和生殖道分泌物(表1、表2),而近年很多研究提示,衣原體感染的胃腸道定植可能是衣原體感染復(fù)發(fā)的重要原因,衣原體感染標(biāo)本采集的困難也是衣原體診治難點(diǎn)之一。
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